粪便基因组DNA提取试剂盒
产品及特点
本试剂盒采用特殊的裂解条件释放粪便中的 DNA,此外,采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统进行粪便 DNA 提取,所提DNA 分子纯度高,可直接进行 PCR、Real-Time PCR,酶切和杂交等相关分子生物学实验,整个过程安全可靠、简单快速。
它具有下列特点:
1. 简便快捷:操作快速方便,1 小时内可获得高质量的基因组DNA;
2. 适用广泛:适用于不同来源的固态或液态粪便样本;
3. 稳定可靠:高效的沉淀剂去除腐殖酸等杂质,得率高,纯度好,重复性强。
使用方法
(注 意:使用前请先在缓冲液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签)
1. 取粪便 50-100mg 于 2 ml 无菌离心管中,加入 400 μl Buffer GTL,0.25g 研磨珠振荡至样本充分混匀。
(注 意:如果是较干燥的粪便则取 50 mg 即可,加入 400 μl Buffer GTL 在研钵中研磨成细糊状,或在组织研磨仪中加入一颗钢珠研磨成细糊状)
2. 加入 400μl Buffer GL,20μl 蛋白酶 K,充分混匀,70℃金属浴或水浴10 min期间震荡 2-3 次。
(注 意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可将温度提高到 95℃以促进裂解)
3. 室温 12,000 rpm 离心 2 min 沉淀粪便杂质颗粒。
4. 转移上清到一新的离心管中,加入100μl Buffer AB立即涡旋振荡1 min,室温放置2min,转速离心 3 min 再次沉淀杂质。
(注 意:大概可以取 500-600 μl 上清,不要取下面的沉淀)
5. 转移上清到一新的离心管中,注意不要吸到沉淀,加入1/3 体积的立即混匀。
6. 将一吸附柱放入收集管中,将液体全部转入到吸附柱中,12000 rpm离心30 s,弃滤液。
7. 向吸附柱中加入 500 μl Buffer IR,12000 rpm 离心 30 s,弃滤液。
8. 向吸附柱中加入 500 μl Buffer W1,10000 rpm 离心 30 s,弃滤液。
(注 意:按要求在 Buffer W1 中加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
9. 向吸附柱中加入 600 μl Buffer W2,10000 rpm 离心 30 s,弃滤液。
(注 意:按要求在 Buffer W2 中加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
10. 重复操作步骤 9 一次。
11. 将吸附柱放回收集管中,12,000 rpm 离心 2 min,以去除吸附膜上的乙醇。
12. 将吸附柱转入一干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50 ~ 100 μl Buffer EB,室温放置 2 min,12000 rpm 离心 1 min,收集 DNA。
(注 意:为增加基因组 DNA 的得率,可将离心得到的溶液再次加入吸附柱中,室温放置2 min,12000rpm 离心 1 min。洗脱液的 pH 对于洗脱效率有很大影响。若用水作洗脱液应保证其pH值在7.0~8.5范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率)
注意事项
1. 样本应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA降解,降低提取效率;
4. 若 Buffer GTL、GL、W1 中有沉淀,可在 37℃水浴中溶解,摇匀后使用。