MaxEndoFree无内毒素质粒大提试剂盒
产品及特点
本试剂盒适用于无内毒素高纯度质粒 DNA 的大量制备与纯化，柱上去除内毒素，操作简单。菌体经改良的碱裂解处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。通过去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他杂质，得到高纯度的无内毒素质粒 DNA，所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、细胞转染等分子生物学实验。
它具有下列特点：
1. 快捷、高效：操作简便，得率高，节约时间；
2. 纯度高：沉淀致密，去杂干净；
3. 内毒素去除简单：柱上去除内毒素，方便快速，清除干净。
保存条件
在室温(15-25℃)干燥条件下，可保存 12 个月；更长时间的保存可置于 2-8℃ 。若溶 液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入 RNase A 后的 Buffer S1 应置于 2-8℃ 保存，可稳定保存 6 个月。
使用方法
柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml 的平衡液 BL，10,000 rpm离心2 min，弃收集管中滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
1. 取 100 - 200 ml 过夜培养的菌液，室温10,000 rpm 离心2 min，弃上清。
2. 加入 10 ml Buffer S1，旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀。
（注 意：菌体沉淀一定要悬浮均匀，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）
3. 加入 10 ml Buffer S2，温和颠倒混匀使菌体完全裂解，直到溶液变成清亮、粘稠。
（注 意：不可剧烈震荡，以免造成基因组 DNA的污染，所用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏）
4. 加入10 ml Buffer S4，立即颠倒混匀，可见白色的絮状物产生，然后10,000 rpm离心10 -30 min。小心将上清液转移到一干净的 50ml 离心管中，加入0.3 倍混匀。
（注 意：Buffer S4 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀）
5. 小心将上清液转移到离心吸附柱中，10,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中的滤液。
（注 意：吸附柱的容积 15 ml，要分多次转入）
6. 向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer，室温静置 5 min，10,000 rpm离心1 min，弃收集管中滤液。
7. 加入 10 ml Buffer W2，室温 10,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中滤液。
（注 意：Buffer W2为浓缩液，要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）
8. 加入 5 ml Buffer W2，室温 10,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中滤液。
9. 室温 10,000 rpm 离心 5 min，甩干残留液体。
10. 将离心吸附柱置于一个新的 50 ml 塑料离心管中，打开管盖，放置5 min，使乙醇彻底挥发干净。11. 加入 1 - 2 ml 洗脱液 Buffer EB，室温放置 2 min，10,000 rpm 离心2 min，离心管底溶液即质粒 DNA。
（注 意：为增加洗脱效率，可将得到的质粒溶液重新加入到吸附柱中重复步骤11 一次，如需使用去离子水洗脱，可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间）
注意事项
1. 细菌培养时间一般为 12 - 16 小时，如接种量大则应减少培养时间，过度培养会降低质 粒质量甚至导致质粒 DNA 突变。
2. 每次使用时都要注意 Buffer S2 和 S4 是否形成沉淀，如有沉淀37℃溶解后再用。
3. 质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。
